自2012年CRISPR/Cas9基因編輯技術問世，DNA鹼基編輯技術受到科研界的高度關注。為了提高鹼基編輯效率，依次構建成功了第二代鹼基編輯器（BE2）、第三代鹼基編輯器（BE3）、和第四代鹼基編輯器（ABE7.10、ABE 6.3、ABE 7.8和ABE 7.9）。
這些鹼基編輯方法可實現在基因組DNA中直接產生所需的點突變，而不需要產生雙鏈斷裂（DSB）。但最近幾項研究表明鹼基編輯技術在基因組DNA研究中存在脫靶效應，常用的DNA鹼基編輯器依賴的脫氨酶呈現出RNA結合活性。如：胞嘧啶鹼基編輯器（CBE）中使用的胞嘧啶脫氨酶APOBEC1可以作用於DNA和RNA；腺嘌呤鹼基編輯器（ABE）中使用的腺嘌呤脫氨酶TadA誘導RNA上的位點特異性肌苷形成。然而，目前卻缺乏由DNA鹼基編輯引起的任何潛在的RNA突變的報導。針對該問題，腺相關病毒是DNA編輯基因療法最常用的傳遞系統，這些病毒可以在體內維持長期基因表達，因此其用於DNA鹼基編輯誘導的潛在RNA突變的程度受到高度重視。
所以，由周昌陽博士等人帶領的研究團隊，通過利用此系統定量評估了由CBEs和ABEs誘導的RNA單核苷酸變異（SNV）。發現了胞嘧啶鹼基編輯器BE3和腺嘌呤鹼基編輯器ABE7.10都產生了數萬個脫靶RNA SNV。隨後，利用工程化脫氨酶，找到了三種CBE變體和一種ABE變體能將脫靶RNA單核苷酸變異（SNV）降低至低水平狀態，同時保持其有效的DNA靶向活性。該研究揭示了之前一直被忽略的DNA編輯技術產生的脫靶效應的問題，且證明了通過工程化脫氨酶可以消除這種效應。
Vazyme的One Step Mouse Genotyping Kit（PD101）於該研究提供了整套的DNA粗提取以及PCR擴增體系，適用於小鼠基因型快速鑑定 (Rapid Genotyping)。可用於從小鼠尾巴、耳朵以及腳趾等組織中快速釋放基因組DNA，產物可直接進行PCR擴增，無需勻漿、破碎、過夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉澱或柱式純化等操作，極大縮短了實驗耗時。
試劑盒中配有2×Taq Plus Master Mix _Dye Plus(P213)，包含高性能的 Taq Plus DNA Polymerase，dNTP以及優化的緩衝體系，PCR反應時只需加入引物和模板即可進行擴增，減少了開管/移液等操作，顯著降低了樣品交叉污染並且提高了檢測通量和結果的重現性。獨特的保護劑使得TaqPlus Master Mix經過反覆凍融後仍可保持穩定的活性。體系中預混有電泳緩衝液和染料，可在反應結束後直接進行電泳，使用方便快捷。
在該實驗中，293T細胞的裂解採用了該試劑盒中的裂解Buffer，獲得的粗品DNA隨後用於Sanger測序，通過測序數據結果分析，從而鑑定不同的DNA鹼基編輯器產生的效率。
該研究團隊利用轉錄組水平的RNA測序技術，發現了DNA單鹼基編輯技術存在著大量的RNA脫靶效應的問題，初次證明了BE3、BE3-hA3A和ABE7.10等多個單鹼基編輯技術均產生大量的RNA脫靶現象，同時驗證了ABE7.10鹼基編輯器還會導致大量的與癌症相關的癌基因和抑癌基因的突變，有較強的致癌風險。此外，ABE7.10F148A 有望應用於高特異性的DNA與RNA水平的鹼基編輯，且不存在脫靶效應，為單鹼基編輯技術進入臨床治療領域打下了夯實的基礎。
---------------產品資訊-----------------
One Step Mouse Genotyping Kit
PD101-01
● 基於蛋白酶 K 的特製裂解液
使用時，將組織浸泡在預添加了Proteinase K的裂解液中，55℃孵育20 min後95℃加熱5 min即可滅活Proteinase K。
●裂解產物直接用於PCR擴增，無需提取基因組
裂解產物經離心後可直接用做PCR擴增模板，無需傳統提取方式的勻漿、破碎、過夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉澱或柱式純化等操作，極大縮短了實驗耗時。也可將裂解產物上清轉移至另一個滅菌EP管中，- 20℃可存放至少三個月。
●廣泛適用於2 kb以內目標片段擴增，並適用於4對引物以內的多重PCR 反應。
適用於從小鼠尾巴、耳朵以及腳趾等組織中快速釋放基因組DNA，可擴增2kb以內基因進行基因型鑑定，擴增多重性達到4重。