Dual Luciferase Reporter Assay Kit
DL101
| PN | Product Name | Size | Price (TWD) |
| DL101-01 | Dual Luciferase Reporter Assay Kit |
100 rxn | 8,400 |
註 : 溶解分裝後的Luciferase Subatrate (Lyophilized)可於-70℃長期保存, 或-20℃保存不超過1個月
優勢
• 使用螢火蟲螢光素酶及海腎螢光素酶雙螢光對照，結果更可靠。
• 適用於多種真核細胞，細胞裂解液可離心分離凍存使用或直接在孔板中檢測，
節省平板和操作時間，細胞裂解產物可穩定保存室溫8小時，或4℃ 7天，或-20℃三個月以上。
• 螢光強度高，持久性強，螢火蟲螢光素及海腎螢光素光強1分鐘內衰減小於10%，5分鐘內衰減小於30%。
• 線性範圍達7個數量級，適用於強/弱啟動子或高/低水平表達調控的檢測。
說明
此產品用於質粒轉染細胞後檢測Luciferin底物螢光強度以反映Luciferase表達量，檢測基因作用。
先以螢光素（Luciferin）為底物檢測螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)，
後以腔腸素（Coelenterazine)為底物檢測海腎螢光素酶（Renilla luciferase)，
同時抑制Firefly luciferase的催化反應，實現雙螢光素酶報告基因檢測。
Dual Luciferase Reporter Assay Kit可靈敏高效地檢測受基因元件調控的Luciferase表達，
通常將轉錄調控元件克隆於Firefly luciferase的上游，或把3‘UTR調控區克隆於Firefly luciferase下游，
轉染細胞後進行相應刺激物誘導，裂解細胞並測定螢光素酶活性。
Renilla luciferase作用為校正轉染效率的內參，以消除孔間細胞數量和轉染效率的差異。
Firefly luciferase催化Luciferin發光波長為560 nm，Renilla luciferase催化Coelenterazine發光波長為465 nm。
實驗範例
優勢
• 使用螢火蟲螢光素酶及海腎螢光素酶雙螢光對照，結果更可靠。
• 適用於多種真核細胞，細胞裂解液可離心分離凍存使用或直接在孔板中檢測，
節省平板和操作時間，細胞裂解產物可穩定保存室溫8小時，或4℃ 7天，或-20℃三個月以上。
• 螢光強度高，持久性強，螢火蟲螢光素及海腎螢光素光強1分鐘內衰減小於10%，5分鐘內衰減小於30%。
• 線性範圍達7個數量級，適用於強/弱啟動子或高/低水平表達調控的檢測。
說明
此產品用於質粒轉染細胞後檢測Luciferin底物螢光強度以反映Luciferase表達量，檢測基因作用。
先以螢光素（Luciferin）為底物檢測螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)，
後以腔腸素（Coelenterazine)為底物檢測海腎螢光素酶（Renilla luciferase)，
同時抑制Firefly luciferase的催化反應，實現雙螢光素酶報告基因檢測。
Dual Luciferase Reporter Assay Kit可靈敏高效地檢測受基因元件調控的Luciferase表達，
通常將轉錄調控元件克隆於Firefly luciferase的上游，或把3‘UTR調控區克隆於Firefly luciferase下游，
轉染細胞後進行相應刺激物誘導，裂解細胞並測定螢光素酶活性。
Renilla luciferase作用為校正轉染效率的內參，以消除孔間細胞數量和轉染效率的差異。
Firefly luciferase催化Luciferin發光波長為560 nm，Renilla luciferase催化Coelenterazine發光波長為465 nm。
實驗範例
使用前注意事項
實驗步驟
細胞裂解
吸棄細胞培養基，用PBS洗滌兩次，按下表建議加入適量1 ×Cell Lysis Buffer，室溫靜置或振搖裂解5分鐘，
吸取細胞裂解產物至1.5 ml離心管，12000g常溫離心2分鐘，取上清用於後續檢測或在細胞培養板中加入底物檢測。
註：如果螢光素酶的表達水平過低，可適當減少裂解液的使用量以提高蛋白濃度。
Firefly luciferase反應檢測
將100 µl平衡至室溫的Luciferase Substrate加入檢測管或酶標板中，吸取20 µl細胞裂解上清至檢測管或酶標板孔，
迅速混勻後立即於螢光檢測儀(Luninometer)或酶標儀中檢測Firefly luciferase報告基因活性。
Renilla luciferase反應檢測
反應液加100 µl 新鮮配製的Renilla 底物工作液，混勻後螢光檢測儀或酶標儀中檢測Renilla luciferase報告基因活性。
- 將Reaction Buffer II 倒入含有凍乾底物的Luciferase Substrate棕色避光瓶，混勻後分裝並避光保存於-80℃；
- 每次使用前以1:4的比例將5 ×Cell Lysis Buffer與ddH2O充分混合，置於冰上備用；
- Renilla Substrate溶解於乙醇中，首次使用時請短暫離心，小心量取管內溶液體積，如體積減少，請加入乙醇；
- 使用時將Renilla Substrate於冰上暫存，以50:1的比例將Stop & Reaction Buffer和Renilla Substrate混勻；
- 酶促反應對溫度較為敏感，因此加樣檢測前需將細胞裂解產品和檢測底物液均平衡至室溫後使用；
- 儀器選擇：能夠檢測化學發光的儀器都適用本試劑盒，但相同樣品，不同儀器的本底信號值和測量值均可能不同，因此需在預實驗中檢測僅加入螢光底物的本底信號，且對於同一樣本的檢測，不同儀器的數值不可橫向比較。 若使用全波長酶標儀進行檢測，為防止孔間干擾，推薦使用不透明酶標板，且檢測孔間有一定間隔。
實驗步驟
細胞裂解
吸棄細胞培養基，用PBS洗滌兩次，按下表建議加入適量1 ×Cell Lysis Buffer，室溫靜置或振搖裂解5分鐘，
吸取細胞裂解產物至1.5 ml離心管，12000g常溫離心2分鐘，取上清用於後續檢測或在細胞培養板中加入底物檢測。
| Cell Culture Plate | Volumn of 1×Cell Lysis Buffer |
| 6-well | 500 µl |
| 12-well | 200 µl |
| 24-well | 100 µl |
| 48-well | 50 µl |
| 96-well | 20 µl |
Firefly luciferase反應檢測
將100 µl平衡至室溫的Luciferase Substrate加入檢測管或酶標板中，吸取20 µl細胞裂解上清至檢測管或酶標板孔，
迅速混勻後立即於螢光檢測儀(Luninometer)或酶標儀中檢測Firefly luciferase報告基因活性。
Renilla luciferase反應檢測
反應液加100 µl 新鮮配製的Renilla 底物工作液，混勻後螢光檢測儀或酶標儀中檢測Renilla luciferase報告基因活性。
說明書下載
檔案下載