5min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

C601
　
      
 
PN Product Name Size Price (TWD)
C601-01 5min TA/Blunt-Zero Cloning Kit 25 rxn 8,190
C601-02 5min TA/Blunt-Zero Cloning Kit 50 rxn 14,700

 
   優勢   

•  相容：能夠同時相容TA克隆與平末端克隆
•  簡單：加入片段即可
•  快速：僅需5min
•  高效：克隆效率高且陽性率＞95%
 
   說明   

本產品是第二代TOPO克隆試劑盒，包含第二代Topoisomerase、含有自殺基因ccdB的載體以及平末端因數。使用第二代Topoisomerase，配合最適的buffer，活性更高，進一步提高克隆效率，室溫5 min完成高效連接。使用含有自殺基因ccdB的載體，當插入片段與載體成功連接時，破壞ccdB正確表達，宿主細胞能夠正常生長，否則宿主細胞不能正常生長，從而實現“Zero”背景。添加平末端化因數，使得本產品能夠同時相容TA克隆與平末端克隆。

  流程   

兼容性強 : 
圖A：TA-Zero Cloning
1) 將Taq酶(如Vazyme的Taq系列)的擴增產物(3’端帶A)加入到5 × TA/Blunt-Zero Cloning Mix中，室溫反應5 min。
2) Mix中的平末端化因子將Taq酶擴增產物末端的A鹼基去掉，形成平末端化產物。
3) 平末端化產物5’-OH進攻TOPO酶與載體之間的磷酸鍵，TOPO酶被釋放出來，載體與平末端化產物形成環形重組子。
 
圖B：Blunt-Zero Cloning
1) 將高保真酶(如Vazyme的Phanta系列)的擴增產物(平末端)加入到5 × TA/Blunt-Zero Cloning Mix中，室溫反應5 min。
2) 平末端產物5’-OH進攻TOPO酶與載體之間的磷酸鍵，TOPO酶被釋放出來，載體與平末端化產物形成環形重組子。

簡易流程 : 

克隆效率高 : 
對不同插入片段進行測試並與與競品比對，克隆數統計：（個）
TA連接測試：
　 50 bp 0.5 kb 1 kb 2 kb 3 kb 4.5 kb
Vazyme 100 600 3200 2000 320 400
Supplier T 70 600 900 280 290 80

平末端連接測試：
　 50 bp 0.5 kb 1 kb 2 kb 3 kb 4.5 kb
Vazyme 150 1800 4500 2000 1200 650
Supplier T 90 1500 2500 1000 800 150

陽性率高：使用插入片段為1kb，轉化後隨即挑取單克隆進行菌落PCR鑒定，Marker為諾唯贊DL5000 DNA marker（MD104），

測試結果陽性率為100%

​   文獻發表   

** Vazyme 克隆&突變 產品榮登 SCIENCE !  新聞連結


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