(R312) HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)
R312
| PN | Product Name | Size | Price (TWD) |
| R312-01 | HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper) |
50 rxn (20μl/rxn) |
13,230 |
| R312-02 | HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper) |
100 rxn (20μl/rxn) |
19,320 |
優勢
• 超強溫度耐受力在高溫條件下能打開RNA複雜二級結構，得到更長cDNA
• 寬廣的模板起始量範圍，從1 pg-5 μg總RNA，可擴增片段長達15 kb以上
• 含 Random hexamers 與 Anchored Oligo-dT，特異性高，保證第一鏈cDNA合成效率和成功率
• 寬廣的模板起始量範圍，從1 pg-5 μg總RNA，可擴增片段長達15 kb以上
• 含 Random hexamers 與 Anchored Oligo-dT，特異性高，保證第一鏈cDNA合成效率和成功率
• 針對RT-PCR及RT-qPCR均有不同的操作步驟可供選擇
• 檢測靈敏度達 1 pg
• gDNA wiper Mix可迅速徹底去除基因組污染
• 適用stem-loop miRNA cDNA合成 (加入stem-loop miRNA RT primer，不使用hexamers 與 Oligo-dT)
• 逆轉錄效率高於二代產品HiScript II Reverse Transcriptase• 檢測靈敏度達 1 pg
• gDNA wiper Mix可迅速徹底去除基因組污染
• 適用stem-loop miRNA cDNA合成 (加入stem-loop miRNA RT primer，不使用hexamers 與 Oligo-dT)
• 靈活選擇引子： 針對不同實驗設計可靈活使用不同類型的逆轉錄引物
• gDNA wiper Mix可迅速徹底去除基因組污染：保證後續結果更加可靠，並可簡化qPCR引子設計，無需跨內含子設計引子
說明
HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)是HiScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)的升級版本，包含新一代逆轉錄酶HiScript III Reverse Transcriptase和針對逆轉錄優化的最適Buffer，進一步提高了一鏈合成的效率。該試劑盒中的5 × gDNAwiper Mix可在42℃，2 min條件下快速去除基因組DNA污染，保證後續結果更加可靠，並可簡化qPCR引子設計，無需跨內含子設計引子。試劑盒中包含單組分逆轉錄引子Oligo (dT)20VN和Random hexamers，使用者可根據需要，靈活選擇逆轉錄引子進行後續實驗。本試劑盒既可合成用於克隆等下游實驗的全長cDNA (可達20 kb)，亦可合成高度均一的用於qPCR定量的cDNA。
實驗範例
1.後續實驗為PCR
以1μg HeLa細胞RNA為範本，按照R302說明書推薦體系進行逆轉錄，以1μl cDNA為範本，用2 ×Vazyme Lamp Master Mix (Dye Plus)（Vazyme #P312）進行長片段擴增，將得到的產物進行瓊脂糖凝膠電泳，結果如圖1所示：擴增條帶單一且產量高。
(註) M：DL15000 Marker(Vazyme #MD103)
2.後續實驗為qPCR
以100 ng HeLa 細胞RN為範本，使用 HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper) (Vazyme #R312) 以及市售其他逆轉錄產品 (分別來自Supplier Ta、Th1、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti)，按照各自說明書推薦程式進行逆轉錄反應。將得到的 cDNA 進行多個基因的 qPCR定量分析。以不同公司產品為橫坐標，△CT (△CT = Vazyme #R312 cDNA擴增CT值–各公司逆轉錄產品 cDNA 擴增CT值)為縱坐標繪圖。從圖中可以看出，除一些體系Th1△CT＞0外，其餘公司逆轉錄產品均△CT＜0，說明 Vazyme #R312逆轉錄效率優於Ta、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti 相關逆轉錄產品。
論文發表
• Liu X , Wei W , Li X , et al. (2017). BMI1 and MEL18 Promote Colitis-Associated Cancer in Mice via REG3B and STAT3. Gastroenterology. IF: 18.392
• Ju J, Chen A, Deng Y, et al. (2017).NatD promotes lung cancer progression by preventing histone H4 serine phosphorylation to activate Slug expression.[J]. Nature Communications, 2017, 8(1):928. IF:12.124
• Ding W, Liu WQ, Jia Y, et al. (2016). Biosynthetic investigation of phomopsins reveals a widespread pathway for ribosomal natural products in Ascomycetes. PNAS, 113(13):3521-3526. IF:9.674
• Wang H, Liang L, Dong Q,et al.（2018）Long noncoding RNA miR503HG, a prognostic indicator, inhibits tumor metastasis by regulating the HNRNPA2B1/NF-κB pathway in hepatocellular carcinoma. Theranostics. IF:8.172
說明書下載
以1μg HeLa細胞RNA為範本，按照R302說明書推薦體系進行逆轉錄，以1μl cDNA為範本，用2 ×Vazyme Lamp Master Mix (Dye Plus)（Vazyme #P312）進行長片段擴增，將得到的產物進行瓊脂糖凝膠電泳，結果如圖1所示：擴增條帶單一且產量高。
(註) M：DL15000 Marker(Vazyme #MD103)
2.後續實驗為qPCR
以100 ng HeLa 細胞RN為範本，使用 HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper) (Vazyme #R312) 以及市售其他逆轉錄產品 (分別來自Supplier Ta、Th1、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti)，按照各自說明書推薦程式進行逆轉錄反應。將得到的 cDNA 進行多個基因的 qPCR定量分析。以不同公司產品為橫坐標，△CT (△CT = Vazyme #R312 cDNA擴增CT值–各公司逆轉錄產品 cDNA 擴增CT值)為縱坐標繪圖。從圖中可以看出，除一些體系Th1△CT＞0外，其餘公司逆轉錄產品均△CT＜0，說明 Vazyme #R312逆轉錄效率優於Ta、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti 相關逆轉錄產品。
論文發表
• Liu X , Wei W , Li X , et al. (2017). BMI1 and MEL18 Promote Colitis-Associated Cancer in Mice via REG3B and STAT3. Gastroenterology. IF: 18.392
• Ju J, Chen A, Deng Y, et al. (2017).NatD promotes lung cancer progression by preventing histone H4 serine phosphorylation to activate Slug expression.[J]. Nature Communications, 2017, 8(1):928. IF:12.124
• Ding W, Liu WQ, Jia Y, et al. (2016). Biosynthetic investigation of phomopsins reveals a widespread pathway for ribosomal natural products in Ascomycetes. PNAS, 113(13):3521-3526. IF:9.674
• Wang H, Liang L, Dong Q,et al.（2018）Long noncoding RNA miR503HG, a prognostic indicator, inhibits tumor metastasis by regulating the HNRNPA2B1/NF-κB pathway in hepatocellular carcinoma. Theranostics. IF:8.172
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