Human Global DNA Methylation QPCR LINE1 Assay
600105BSP
| PN | Product Name | Size | Price (TWD) |
| 600105BSP | Human Global DNA Methylation QPCR LINE1 Assay | 250 rxn / PK | 4,500 |
說明
DNA甲基化 扮演調控基因表達功能，在不改變DNA序列的前提下，影響遺傳表現。
屬於 Epigenetic modification 表觀基因修飾
常發生在基因啟動子區域，CG 的連續位置，稱為CpG island，來調控基因轉錄作用。
當DNA區域受甲基化修飾，
其會關閉 啟動子及轉錄起始點之轉錄作用，導致基因表達量下降或不表達。
LINE1 是DNA轉座子長散核元件(Long interspersed nuclear elements, LINEs) 的一種,
LINE1 約占人類基因組約17%
Human Global DNA Methylation QPCR LINE1 Assay，
使用 Real-time PCR 檢測經 Bisulfite Converted 與富集回收後的人類 單鏈 BC-DNA
Bisulfite Converted DNA
C to T Conversion 會使得 dsDNA失去 雙股螺旋 配對 的特性 全部變成 單鏈DNA
回收富集時 單鏈DNA 更容易喪失
此外 Bisulfite 試劑溶液 為 強氧化劑
保存時 極容易與空氣中分子 氧化還原作用 失去強氧化劑的能力
造成 gDNA 執行 Bisulfite conversion 效率不佳
所以 Human Global DNA Methylation QPCR LINE1 Assay
可以作為確認
* Human dsDNA Bisulfite Conversion 流程 是否成功 (C to T conversion)。
* 單鏈 BC-DNA 富集回收 (Enriched ) 是否成功
* 單鏈 BC-DNA 總量 (BC-DNA input amount )校正 / 定量校正
實驗範例
* 流程:
* 材料配置:
| Items | uL |
| ddH2O | 2.5 |
| 2X TopMe MM | 5 |
| 20X Assay | 0.5 |
| BC-DNA | 2 |
| Total Vol. | 10 |
***不可使用含 UNG/UDG 之Master Mix
*QPCR反應條件:
| 循環 | 溫度 | 時間 | 收光 |
| 1 | 95°C | 5 min | ---- |
40 |
95°C 60°C |
3 sec 40 sec |
---- FAM |
*qPCR 結果:
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