Hyperactive In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina（pG-Tn5）/（pA-Tn5）
TD901 / TD902
| PN | Product Name | Size | Price (TWD) |
| TD901-01 | Hyperactive In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina（pG-Tn5） | 12 rxn | 53,340 |
| TD901-02 | Hyperactive In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina（pG-Tn5） | 48 rxn | 199,815 |
| TD902-01 | Hyperactive In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina（pA-Tn5） | 12 rxn | 53,340 |
| TD902-02 | Hyperactive In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina（pA-Tn5） | 48 rxn | 199,815 |
▲ 產品組分表中標注的顏色代表各組分管蓋顏色。
▲ ConA beads = Concanavalin A-coated magnetic beads。
▲ TAE = TruePrep Amplify Enzyme; TAB = TruePrep Amplify Buffer。
產品說明
應用領域
組蛋白修飾，轉錄因子，RNA polymerase II等。
技術優勢
● 操作簡單：可一步實現DNA的片段化和接頭連接，僅需9 小時即可實現從細胞到二代測序文庫的轉化
● 超高活性：兼具Protein G&Tn5活性，DNA片段化活性極高
● 細胞起始量低：可兼容低至60個細胞，甚至單細胞
● 純度高：蛋白純度高、核酸殘留低
1. CUT&Tag技術原理及應用
CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是替換傳統的ChIP-Seq用以研究蛋白質-基因組互作的新技術，與後者相比，它具有顯著優勢，如：信噪比高，可重複性好，實驗週期短（1天實現從細胞到文庫構建），細胞投入量低等，尤其適用於早期胚胎發育、幹細胞、腫瘤以及表觀遺傳學等研究領域。
CUT&Tag技術的實驗流程簡單，主要包括：
①收集細胞；②分別孵育一抗和二抗；③孵育pA/pG-Tn5轉座子（Hyperactive pA/pG-Tn5 Transposon）；④激活轉座子，進行DNA片段化；⑤DNA提取；⑥文庫擴增與純化。
2. 轉座子切割活性高
如圖所示，對Vazyme #TD901中提供的pG-Tn5轉座子進行活性檢測，投入50 ng 人基因組DNA（gDNA），1 μl轉座子可快速（10 min）實現DNA片段化，說明該融合酶切割DNA活性很高。
3. 細胞起始量低
A: CUT&Tag峰形圖
如圖A所示：投入不同起始量的HEK293細胞（100或10,000個細胞），按照Vazyme #TD901說明書推薦的反應體系進行CUT&Tag實驗；其中，pG-Tn5轉座子使用的終濃度為0.04 μM，一抗為H3K27me3（CST，#9733），二抗為Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271）。通過使用Agilent 2100 Bioanalyzer進行文庫分佈檢測，結果顯示對於不同細胞投入量（100個或10,000個細胞），均可構建出與文獻中類似的呈現Ladder狀的文庫，說明該體系能夠兼容低細胞起始量的實驗。
B：Peak 富集
如圖B所示：將圖A中的CUT&Tag文庫進行二代測序分析，可以看出，100個細胞可以達到與10,000細胞類似的Peak富集，且信噪比顯著高於ChIP-Seq。
4. 實驗重複性好
如上圖所示，投入不同起始量（1,000、10,000或100,000）的HEK293細胞，每種起始量做2個重複，按照Vazyme #TD901說明書推薦的反應體系進行CUT&Tag實驗；其中，pG-Tn5轉座子使用的終濃度為0.04 μM，一抗為H3K27me3（CST，#9733），二抗為Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271），陰性對照為與一抗同源的IgG（CST，#2729）。對上述文庫樣本進行二代測序，針對富集的reads進行pearson相關性分析，可以看出，平行樣本之間的重複性較好。
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