成分說明   
 

 

本試劑盒適用於從生物液體樣本(肺泡灌洗液、血液、痰液、腦脊液、拭子液等)和微生物培養物樣本中分離純化DNA和RNA。試劑盒採用化學法與機械法相結合的裂解方法，能夠高效裂解細胞壁較厚的細菌或真菌類樣本。本試劑盒中使用的高親和力矽基磁珠，可在高鹽緩衝液作用下，通過氫鍵和靜電吸附核酸，經過漂洗去除多餘的蛋白質和鹽；在低鹽洗脫液或Nuclease-free ddH 2 O作用下，磁珠釋放核酸，從而達到快速分離純化核酸的目的。本試劑盒提取過程安全無毒、操作便捷，無需使用酚氯仿等有毒試劑，在保障核酸提取效率的同時最大限度地去除蛋白質、無機鹽及其他雜質。分離的DNA和RNA適用於多種下游應用，包括PCR、Real-Time PCR、宏基因組文庫構建、DNA/RNA共建庫等。

 

1. 快速



圖1. RM601操作流程概要

2. 兼容

將低起始量的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、畢赤酵母和PRV（DNA病毒）疫苗稀釋液、 PRRSV（RNA病毒）疫苗稀釋液添加至肺泡灌洗液、口腔拭子、痰液等樣本中，參照RM601和Supplier A同類產品提取流程進行提取，使用qPCR對提取得到的微生物核酸進行定量，檢測的平均Ct值越低，表示檢出率越高。結果表明：RM601對不同樣本中不同微生物的提取效率優於Supplier A（圖2）。



 圖2. 提取產物qPCR定量結果


3. 高檢出

在100 μl人全血中摻入10 3的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草芽孢桿菌等多種病原微生物，參照Vazyme #RM601和Supplier B同類產品提取流程進行提取，提取產物使用Vazyme #ND617進行文庫構建，經質控合格的文庫使用Illumina HiSeq X10平台進行PE150測序。結果表明：Vazyme #RM601對不同種類病原微生物的提取效率優於Supplier B同類產品（圖3）。


 圖3. 不同病原微生物檢出Reads數


  常見問題  

Q1: 痰液樣本加樣不准確
A1:
1. 若樣本為白色泡沫狀稀痰，取相應體積的痰液，加入5倍體積的N-乙酰半胱氨酸溶液(10 g/L)，振盪混勻液化30 - 60 min後進行提取
2. 若樣本為白色、黃白色粘痰或黃色伴血絲痰、血痰，取相應體積的痰液，向其中加入10倍體積的N-乙酰半胱氨酸溶液(10 g/L)，振盪液化30 - 60 min後進行提取

Q2: 病毒樣本檢出低
A2: 若關注度偏向於病毒檢出，可省略Lysis Tube 2裂解步驟，按照如下步驟操作：
1. 向2 ml Nuclease-free Tube中依次加入400 μl樣本、40 µl Proteinase K、200 µl Lysis Buffer 2、200 µl Binding Buffer 2 混勻。
2. 將2 ml Nuclease-free Tube置於56 ℃水浴10 min，瞬時離心，向離心管中加入490 μl異丙醇。
      
Q3:核酸產量低
A3:
1.適當增加機械裂解時間，充分破壁
2.將Nuclease-free ddH 2 O預熱至56 ℃後再進行產物洗淨
3.剩餘Wash Buffer A中加入1.35倍體積的無水乙醇
4.剩餘Wash Buffer B中加入4倍體積的無水乙醇

Q4:核酸純度低
A4: 增加一次Wash Buffer A漂洗步驟及增加一次Wash Buffer B漂洗步驟





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