(P701) LAMP Isothermal PCR Enzyme (= Bst DNA Polymerase Large Fragment )
P701
| PN | Product Name | Size (20ul/rxn) |
Price (TWD) |
| P701-01 | Bst DNA Polymerase Large Fragment | 800 U | Inquiry |
| P701-02 | Bst DNA Polymerase Large Frament | 8,000 U | Inquiry |
組份
| Components | P701-01 800 U | P701-02 8,000 U |
| Bst DNA Polymerase Large Fragment a (8 U/uL) | 100 uL | 1 mL |
| 10 x ThermoPlo Buffer b | 1 mL | 3 x 1 mL |
| MgSO4 (100 mM) | 1 mL | 2 x 1 mL |
a. 儲存於10 mM Tris-HCl pH 7.5，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，0.1% Triton X-100，50% 甘油。
b. 200 mM Tris-HCl pH 8.8，100 mM KCl，100 mM (NH4)2SO4，20 mM MgSO4，1% Triton X-100。
優勢
• 具有很強的鏈置換活性
說明
Bst DNA Polymerase Large Fragment 是 Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，
具有5'→ 3'DNA聚合酶活性，以及很強的鏈置換 (strand displacement)活性，但缺失5´→ 3´核酸外切酶活性。
Bst DNA Polymerase Large Fragment可用於等溫擴增反應，
例如 LAMP (Loop-mediated isothermal amplification), RCA (Rolling-circle amplification)等。
實驗結果(範例)
(A) 加入 Ultra GelRed 核酸染劑, 以 BluPAD 照膠儀 分析
PCR products (Dilution 10x)
100x Ultra GelRed
Performed on BluPAD Dual LED Blue/White Light Transilluminator
(B) DNA 微流體電泳分析結果:
Performed on MultiNA MCE-202, Shimadzu
Q & A
Q1：重複性差。
A1：使用螢光定量儀器檢測 / 添加甜菜鹼 Betain / 引子可能有問題。
Q2：LAMP的等溫擴增引子如何設計及篩選？
A2：LAMP的等溫擴增引子的設計請參考http://primerexplorer.jp/e/，建議使用V4版本。
LAMP等溫擴增引子的初步篩選可參照操作手冊，具體需要通過實驗來驗證最佳引子。
Q3：LAMP等溫擴增產物可以做酶切鑑定嗎？
A3：可以。但是開蓋容易造成氣溶膠污染，一定要謹慎操作。
Q4：無擴增。
A4：建議多設計幾組引子，用實驗來驗證，選出最佳引子。
Q5：加環引子出現假陽性，不加就正常，是什麼原因？
A5：若環引子經驗證無污染，則可能是環引子導致了非特異的擴增，此情況建議不使用環引子或者更換別的環引子。
Ultra GelRed 核酸染劑 GR501
BluPAD 照膠儀 BP001CU
dNTP MIX ( 2.5mM each, 1 mL ) P032-01
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