Name: Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment (P703)
Brand: 鼎捷生技
SKU: NO3656

Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment (P703)

P703

PN	Product Name	Size (25ul/rxn)	Price (TWD)
P703-01	Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment	1,600 U	4,935
P703-02	Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment	8,000 U	19,425

組份

Components	P703-01 1,600 U	P703-02 8,000 U
Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment (8 U/μl)^a	200 uL	1 mL
10 × IsothermalAmp Buffer	500 uL	3 x 1 mL
MgSO₄(100 mM)	300 uL	2 x 1 mL

a. 儲存於10 mM Tris-HCl pH 7.5，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，0.1% Triton X-100，50% 甘油。

優勢

• 具有很強的鏈置換活性

說明

Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment 是 Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，
具有5'→ 3'DNA聚合酶活性，以及很強的鏈置換 (strand displacement)活性，但缺失5´→ 3´核酸外切酶活性。
Bst DNA Polymerase Large Fragment可用於等溫擴增反應，
例如 LAMP (Loop-mediated isothermal amplification), HDA(Helicase-Dependent Amplification), RCA (Rolling-circle amplification)等。
與Bst II DNA Polymerase Large Fragment 相比，Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment結合新一代的熱啟動技術，可在低於50℃的溫度下抑
制聚合酶活性，50℃以上可快速釋放酶活性，具有更高的擴增速度、特異性、耐鹽性和熱穩定性，且支持室溫下配製反應體系。

(1)擴增性能強

以λDNA為模板，將λDNA稀釋到 2×102 copies/μl，模板添加量為5 μl。
從圖中可以看出，檢測靈敏度上，Vazyme #P703與測試Bst酶都能夠檢測到103 copies/rxn λDNA；
在反應速度上，Vazyme #P703快於絕大部分常見同類產品；
同時，Vazyme #P703相比於對照產品在抑制非特異擴增上性能更好。

(2)高雜質耐受度

以human-Actin為檢測靶標，採集唾液、口腔拭子、全血加入裂解液後渦旋混勻室溫放置5 min，模板添加量為5 μl，
使用Vazyme #P703和Supplier A、B、C、D按照說明書進行反應，可以看到Vazyme #P703在粗裂解樣本中擴增速度優於大多數同類產品。

(3)室溫建立體系

使用Vazyme #P703和Supplier A、B、C、D按照各自說明書，分別在加完試劑後立即檢測及室溫放置3 h後再進行檢測，
從圖中可以看出室溫放置3 h後，Vazyme #P703和Supplier B、Supplier C穩定性好，擴增性能基本不發生變化。

Q & A

Q1：重複性差。

A1：使用螢光定量儀器檢測 / 添加甜菜鹼 Betain / 引子可能有問題。

Q2：LAMP的等溫擴增引子如何設計及篩選？

A2：LAMP的等溫擴增引子的設計請參考http://primerexplorer.jp/e/，建議使用V4版本。
LAMP等溫擴增引子的初步篩選可參照操作手冊，具體需要通過實驗來驗證最佳引子。

Q3：LAMP等溫擴增產物可以做酶切鑑定嗎？

A3：可以。但是開蓋容易造成氣溶膠污染，一定要謹慎操作。

Q4：無擴增。

A4：建議多設計幾組引子，用實驗來驗證，選出最佳引子。

Q5：加環引子出現假陽性，不加就正常，是什麼原因？

A5：若環引子經驗證無污染，則可能是環引子導致了非特異的擴增，此情況建議不使用環引子或者更換別的環引子。