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(P703) Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment

P703
 
     
 PN  Product Name   Size
 (25ul/rxn)
 Price (TWD)
P703-01 Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment 1,600 U 4,200
P703-02 Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment 8,000 U 14,280







   組份  
 
  Components   P703-01  1,600 U   P703-02  8,000 U
  Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment (8 U/μl)a   200 uL   1 mL
  10 × IsothermalAmp Buffer   500 uL   3 x 1 mL
  MgSO4 (100 mM)   300 uL   2 x 1 mL

a. 儲存於10 mM Tris-HCl pH 7.5,50 mM KCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.1% Triton X-100,50% 甘油。

 
   優勢  

• 具有很強的鏈置換活性


   說明   

Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment 是 Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分,
具有5'→ 3'DNA聚合酶活性,以及很強的鏈置換 (strand displacement)活性,但缺失5´→ 3´核酸外切酶活性。
Bst DNA Polymerase Large Fragment可用於等溫擴增反應,
例如 LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),
HDA(Helicase-Dependent Amplification), RCA (Rolling-circle amplification)等。
與Bst II DNA Polymerase Large Fragment 相比,Bst II Pro DNA Polymerase Large Fragment結合新一代的熱啟動技術,可在低於50℃的溫度下抑
制聚合酶活性,50℃以上可快速釋放酶活性,具有更高的擴增速度、特異性、耐鹽性和熱穩定性,且支持室溫下配製反應體系。

 
(1)擴增性能強

以λDNA為模板,將λDNA稀釋到 2×102 copies/μl,模板添加量為5 μl。
從圖中可以看出,檢測靈敏度上,Vazyme #P703與測試Bst酶都能夠檢測到103 copies/rxn λDNA;
在反應速度上,Vazyme #P703快於絕大部分常見同類產品;
同時,Vazyme #P703相比於對照產品在抑制非特異擴增上性能更好。

(2)高雜質耐受度

以human-Actin為檢測靶標,採集唾液、口腔拭子、全血加入裂解液後渦旋混勻室溫放置5 min,模板添加量為5 μl,
使用Vazyme #P703和Supplier A、B、C、D按照說明書進行反應,可以看到Vazyme #P703在粗裂解樣本中擴增速度優於大多數同類產品。​



(3)室溫建立體系

使用Vazyme #P703和Supplier A、B、C、D按照各自說明書,分別在加完試劑後立即檢測及室溫放置3 h後再進行檢測
,
從圖中可以看出室溫放置3 h後,Vazyme #P703和Supplier B、Supplier C穩定性好,擴增性能基本不發生變化。





   Q & A  
 

Q1:重複性差。

A1:使用螢光定量儀器檢測 / 添加甜菜鹼 Betain / 引子可能有問題。
 

Q2:LAMP的等溫擴增引子如何設計及篩選?

A2:LAMP的等溫擴增引子的設計請參考http://primerexplorer.jp/e/,建議使用V4版本。
         LAMP等溫擴增引子的初步篩選可參照操作手冊,具體需要通過實驗來驗證最佳引子。

 

Q3:LAMP等溫擴增產物可以做酶切鑑定嗎?

A3:可以。但是開蓋容易造成氣溶膠污染,一定要謹慎操作。
 

Q4:無擴增。

A4:建議多設計幾組引子,用實驗來驗證,選出最佳引子。
 

Q5:加環引子出現假陽性,不加就正常,是什麼原因?

A5:若環引子經驗證無污染,則可能是環引子導致了非特異的擴增,此情況建議不使用環引子或者更換別的環引子。
 

   搭配產品   
 LAMP Fluorescent Dye, RP001-01 
 dNTP MIX ( 2.5mM each, 1 mL ), P032-01

說明書下載
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