Discover-sc WTA Kit V2
N711
單細胞轉錄組定序流程
| PN | Product Name | Size | Price (TWD) |
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N711-01
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Discover-sc WTA Kit V2
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12 rxn
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99,960
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N711-02
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Discover-sc WTA Kit V2
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24 rxn
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179,865
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N711-03
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Discover-sc WTA Kit V2
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96 rxn
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479,430
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優勢
--模板起始量低：單個細胞或10pg Total RNA即可作為起始模板，進行高效擴增
--擴增靈敏度高：使用LNA技術及精心優化的反應體系，大幅度增加了低表達基因的檢出量
--產物完整性好：通過雙端引物擴增全長cDNA，獲得全轉錄組信息，避免了5'和3'偏好性
--操作成功率大：大大減少了RNA樣品的處理，從而最大限度避免了樣品損失的風險，提高了操作成功率
--體積兼容性廣：樣品兼容體積可高達5 μl，兼容不同濃度的模板進行擴增
--模板起始量低：單個細胞或10pg Total RNA即可作為起始模板，進行高效擴增
--擴增靈敏度高：使用LNA技術及精心優化的反應體系，大幅度增加了低表達基因的檢出量
--產物完整性好：通過雙端引物擴增全長cDNA，獲得全轉錄組信息，避免了5'和3'偏好性
--操作成功率大：大大減少了RNA樣品的處理，從而最大限度避免了樣品損失的風險，提高了操作成功率
--體積兼容性廣：樣品兼容體積可高達5 μl，兼容不同濃度的模板進行擴增
說明
Discover-sc WTA Kit V2能以1-1000個細胞或10 pg-10 ng總RNA為模板，通過第一鏈cDNA合成及擴增，獲取足夠的用於序列分析的樣本，從而解決了諸如單細胞等微量樣本因RNA含量過低導致的無法使用常規mRNA-seq進行定序分析的技術難題。試劑盒以Oligo dT Primer為逆轉錄引物進行cDNA合成，並利用Discover-sc Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接頭序列，通過該接頭序列進行後續的PCR擴增，獲得全長cDNA擴增產物，有效避免了cDNA合成過程中的3’偏好性和rRNA的污染。
Discover-sc WTA Kit V2是在Discover-sc WTA Kit基礎上開發的升級版本，其檢測靈敏度、體積兼容性均得到了大幅度提升，更加適合低基因拷貝數及低濃度模板的檢測。
基於Template-switchimg的全長cDNA合成原理
實驗案例
模板起始量低，擴增產物cDNA完整性好
10 pg 293T細胞Total RNA用Discover-sc WTA Kit V2進行擴增，取1 μl cDNA擴增產物用Agilent 2100 Bioanalyzer進行分析。試劑盒以Oligo dT Primer為逆轉錄引物，並利用Discover-sc Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接頭序列，通過該接頭序列進行後續的PCR擴增，獲得全長cDNA擴增產物，同時避免了rRNA的污染。
10 pg 293T細胞Total RNA用Discover-sc WTA Kit V2進行擴增，取1 μl cDNA擴增產物用Agilent 2100 Bioanalyzer進行分析。試劑盒以Oligo dT Primer為逆轉錄引物，並利用Discover-sc Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接頭序列，通過該接頭序列進行後續的PCR擴增，獲得全長cDNA擴增產物，同時避免了rRNA的污染。
文庫質量分析—數據基本指標
Vazyme-1和Vazyme-2是單個293T細胞經過Discover-sc WTA Kit V2 進行擴增，C-1和C-2是單個293T細胞經過用C公司單細胞轉錄組試劑盒進行擴增，取1 ng cDNA擴增產物經TruePrep DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (TD503) 構建文庫。以下均為此文庫數據分析。
基因表達總體情況分析
Discover-sc WTA Kit V2試劑盒擴增產物檢測靈敏度高，單個293T細胞檢測到基因數高達15000個。
數據分佈均一，無偏好性
下圖為Vazyme-1定序片段在基因上的分佈結果，右圖為C-1定序片段在基因上的分佈結果，數據顯示Discover-sc WTA Kit V2擴增很好的保證了基因5'和3'的覆蓋。
表達重複相關性高
下圖為Vazyme-1和Vazyme-2表達重複相關性分析，右圖為C-1和C-2表達重複性相關性分析。數據結果表明表達重複相關性高於C公司。
| PN | Product Name |
| TD503 連結點 |
TruePrep DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (1ng) |
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