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microRNA mimics

 
提供不同長度、不同形式的microRNA mimics,microRNA序列來自sanger miRNA數據庫(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences)

  應用  
利用microRNA mimics模擬活體microRNA活性來研究gain-of-function效應,篩選調控基因表達和影響細胞發育過程的miRNAs,深入研究miRNA在一些生物過程中的作用,如細胞的發育、增殖、分化和凋亡,發現和驗證內源性的miRNA target。

  使用方式  
miRNA mimics 是根據microRNA 成熟體序列設計的雙鏈小RNA分子,用於模擬內源性成熟體miRNA序列。mimics包括一條與目標miRNA成熟體序列一致的序列,以及一條與miRNA成熟體序列互補的序列。特異的miRNA mimics 能夠被導入到表達對應的miRNA細胞中,模擬microRNA的作用,或者與構建有miRNA結合位點的雙螢光素報告系統結合,驗證miRNA與目標基因之間的調控關係。



mRNA表達水平分析 
為了分析miRNA的上調水平,miRNA mimics 可以被轉染進入細胞並通過 Northern blotting 檢測,以及即時定量螢光PCR檢測的方法進行檢測。

目標基因表達水平分析 
通過對轉染miRNA mimics 和陰性對照序列的細胞內mRNA目標基因進行
即時定量螢光PCR檢測和Western Blotting 檢測,可以檢測目標基因蛋白的表達水平,驗證miRNA與目標基因之間的調控關係。

miRNA3'UTR目標位點驗證分析
通過將一個或多個預測的miRNA3'UTR結合目標位點構建到報告質粒上,並將miRNA mimics 和報告質粒共轉染細胞,mimics可以抑制報告質粒上的報告基因,從而可以直接檢驗mimics和miRNA預測結合位點之間的作用關係。建議使用miRNA mimics 陰性對照作為參照,陰性對照的實驗濃度,轉染條件與實驗組相同。

轉染程序 
轉染效率對不同的細胞株和不同的轉染試劑是不同的。
最優的轉染條件還是需要通過實驗來確定。建議優化時的miRNA mimics的濃度範圍可以放寬至1-100nM之間。


 
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