基因表達qPCR定量分析
核酸定量分析
說明
可根據實驗目的，客製化設計實驗方案（相對定量, 絶對定量；SYBR Green染料法或Taqman探針法）
技術服務項目
一. 相對定量
基因表達的研究一般採用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和參比基因同時分別進行定量，然後求出對於參比基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進行比較，可以對不同樣品間的mRNA進行表達量分析。內控基因通常選用表達量相對恆定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時對參比基因的實時檢測，可以對樣品之間由於起始細胞數不同、或RNA純化效率的不同等造成的RNA量誤差進行校正，達到在嚴格意義上對樣品之間的mRNA表達量進行分析之目的。
二. 絶對定量
絶對定量需要構建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標準品，使用已知濃度（拷貝數）的標準品製作標準曲線後，可以使用標準曲線對未知濃度的檢測樣品進行絶對量或者起始拷貝數的分析。
實驗流程
基因表達的研究一般採用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和參比基因同時分別進行定量，然後求出對於參比基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進行比較，可以對不同樣品間的mRNA進行表達量分析。內控基因通常選用表達量相對恆定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時對參比基因的實時檢測，可以對樣品之間由於起始細胞數不同、或RNA純化效率的不同等造成的RNA量誤差進行校正，達到在嚴格意義上對樣品之間的mRNA表達量進行分析之目的。
二. 絶對定量
絶對定量需要構建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標準品，使用已知濃度（拷貝數）的標準品製作標準曲線後，可以使用標準曲線對未知濃度的檢測樣品進行絶對量或者起始拷貝數的分析。
實驗流程
報告內容
送檢服務注意事項
--所需樣品種類：細胞株，動物組織類，植物組織類等等。
--樣品須為非感染性生物。
--樣品須為非感染性生物。
--為了避免樣本RNA degradation，可採下列方式處理檢體:
1. 1份樣本體積與4份RNA Keeper Tissue Stabilizer 均質混合，可穩定保存於4度C一周內。
2. 血液樣本以3倍體積加入RBC Lysis Buffer。
1. 1份樣本體積與4份RNA Keeper Tissue Stabilizer 均質混合，可穩定保存於4度C一周內。
2. 血液樣本以3倍體積加入RBC Lysis Buffer。
--收件方式
線上加入 LINE ID : @topgen
| 細胞收檢 參考流程: | |
| 步驟 | 內容 |
| 1 | 細胞先以PBS Wash 1次 |
| 2 | 加入至少 ~500ul RNA Keeper(RNAlater) |
| 3 | 利用細胞刮杓將細胞分離(Gently) |
| 4 | 利用pipetman將細胞至於 Eppendorf |
| 5 | 加入fresh 500ul PBS至於 Eppendorf |
| 6 | 離心 (3000g, 3min), 使細胞沉降下來 |
| 7 | 移除上清液, 加入fresh 500ul RNA Keeper(RNAlater) |
| 8 | 於4°C 或室溫 保存 2hrs以上(此步驟, 為了能讓RNA Keeper浸潤細胞完全。請避免直接丟冷凍, 會導致細胞破裂, 影響後續RNA品質) |
| 9 | 反應完後, 可冷凍-20°C保存 |
| 組織收檢 參考流程: | |
| 步驟 | 內容 |
| 1 | 將組織剪切至米粒般大小 (浸潤效果較佳) |
| 2 | 加入 ~500ul RNA Keeper(RNAlater) |
| 3 | 於4°C 或室溫 保存 2hrs以上(此步驟, 為了能讓RNA Keeper浸潤細胞完全。請避免直接丟冷凍, 會導致細胞破裂, 影響後續RNA品質) |
| 4 | 反應完後, 可冷凍-20°C保存 |
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