DNA甲基化分析-Bisulfite法

　

SNP/ 單核苷酸多態性分析

  說明  

DNA甲基化研究是表觀遺傳學的重要內容，真核生物中的甲基化僅發生於胞嘧啶（Cytosine），即在DNA甲基化轉移酶的作用下使CpG二核苷酸5'-端的胞嘧啶（Cytosine）轉變為5'-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾的方式在脊椎動物的胚胎發育過程中參與重要的調控作用，以及多種疾病包括各種腫瘤的發病機轉，是目前表觀遺傳學研究的熱點。

  Bisulfite法原理  

用亞硫酸氫鹽 (Bisulfite) 處理基因組 DNA，則未發生甲基化的胞嘧啶（Cytosine）被轉化為尿嘧啶（Uracil），而發生甲基化的胞嘧啶不變。根據某一待測位點或者調查的某一區域序列設計引物進行 PCR 擴增，通過 PCR 電泳、定序、螢光定量及質譜等方法對擴增產物進行檢測，根據檢測結果分析哪些位點發生了甲基化及其甲基化的頻率。

1. 亞硫酸氫鹽定序法 (Bisulfite sequencing PCR，BSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組 DNA，未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。針對要調查的區域設計 BSP 引物進行PCR 擴增，對擴增產物進行定序就可以判斷哪些 CpG 位點發生了甲基化；一般將 PCR 產物克隆後進行定序成功率會比較高，再對目標克隆進行篩選。
實驗流程：
（1） BSP 引物設計：針對感興趣的基因區域進行 BSP 引子的設計 ( 一般擴增產物不超過 300bp)
（2） 亞硫酸氫鹽處理基因組 DNA：純化基因組 DNA 並進行亞硫酸氫鹽的轉化
（3） PCR 擴增目的片段：BSP 引子擴增感興趣的區域
（4） 克隆到載體：將 PCR 產物純化後連接到載體上
（5） 克隆定序：挑取陽性菌斑，純化質粒並定序
（6） 序列分析：對定序的結果進行比對和甲基化分析 (  10個克隆 )

  客戶提供  

◆要研究的基因名稱、種屬
◆要研究的甲基化區域或位點
◆樣本檢體

  送樣要求  


◆樣品要求：細胞≥105 個；組織≥100mg，黃豆大小；全血≥0.5ml；基因組 DNA ≥5ug
◆所有樣品建議低溫運送

 報告內容  
 
 
   訂購方式  

   NT6,000 / CpG Region /樣本
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